증상
갑자기 발병하며 경과는 심급성에서 급성이며 종종 육성기 돼지에서 발생한다. 초기에는 고열, 침울, 기립불능, 식욕부진이 나타나며 피부에는 청색증, 눈과 귀에는 피하부종이 있고 결막은 발적된다. 호흡은 정상일 수 있으나 호흡곤란으로 변화한다. 감염된 돼지는 절뚝거리며 견좌자세를 취한다. 관절은 붓고 열감이 있으며 아파한다. 뇌막염이 있는 돼지는 근육 진전, 후구의 보행실조, 횡와하는 경우도 있다. 부검소견으로는 복강과 심낭강에 다량의 담황갈색 수액이 차있고 흉강 및 복강 장기막에 노란 섬유소 파편이 붙어있다. 이로 인해 폐엽 사이와 흉강장기의 유착이 일어날 수 있다. 폐엽의 암적색 경화소 (폐렴)부위는 있을 수도 있고 없을 수도 있다. 뇌막의 발적과 혼탁함을 관찰할 수 있으며 후지관절의 종창이 있는 경우 관절낭의 발적, 비후와 활액의 증가를 관찰할 수 있다.
가. 원인균 분리 검사
환돈에서 뇌막, 비즙, 페장, 심장, 흉수, 복막을 멸균면봉으로 swab하여 NAD를 40㎍/㎖되게 첨가한 TSA(tryptic soy agar) 혹은 chocolate agar에 24~42시간 배양한 후 회백색이고 점성을 띤 반투명한 것을 골라 X인자 및 V인자 요구성, 용혈성, catalase, indole시험 및 각 종 당분해 검사를 실시하여 확인한다.
나. 병리학적 검사
폐사한 개체를 부검하고 각 장기에 대한 육안검사를 실시하고 뇌, 심장, 폐, 간 등 의 실질장기를 10% 완충 포르말린에 고정하여 일반적인 조직처리 과정을 거쳐 3~4㎛두께로 절편하여 hematoxylin and eosin(H&E)염색을 실시하여 검사한다.
다. 면역조직화학 검사
파라핀 조직절편을 이용한 실질조직에서 원인균을 검출하기 위해 면역조직화학 염색을 실시한다. 즉 파라핀 절편을 탈파라핀 시킨 다음, 0.5% H2O2 함유 무수 메탄올에 30분간 처리한 후 20분간 0.01M PBS(pH 7.2)로 수세하였다. 항원의 검출효과를 높이기 위하여 preoteaseⅩⅣ를 0.01M PBS(pH 7.2)에 녹여 0.01~0.1%의 농도로 10~20분 적용시켰다. PBS로 10분간 세척후 normal serum으로 20분간 반응시켰다. 1차 항체는 H. parasuis serotype 5에 대한 토끼면역 혈청을 제조하여 사용하였는데 8,000~24,000배로 희석하여 37℃에서 3시간 반응시킨 후 PBS로 10분간 세척하였다. 2차 항체는 biontinylated goat anti-rabbit IgG를 30분간 처리후 10분 세척하였고 avidin-biotin peroxidase complex용액을 30분간 처리후 10분간 세척하였고 DAB(3-3`-diaminobezidine tetrachloride)를 사용하여 2~3분간 발색시키고 5분간 수돗물로 세척후 Mayer`s hematoxylin으로 대조 염색한 후 탈수, 청명시킨 후 봉입하여 광학현미경하에서 관찰하였다.
라. 전자현미경 검사
부검시 채취하여 10% 중성 포르말린 용액에 고정시킨 장기 중, 뇌조직을 1㎣ 크기로 자른 후 캡슐에 넣어 흐르는 물에 4시간 이상 수세한 다음 0.1M Cacodylate buffer로 4℃에서 30분씩 2회 수세한 후 1% osmium tetraoxide로 2시간 동안 후 고정하였다. 이를 단계별 알콜에 통과시켜 탈수시킨 다음 epon으로 포매하여 초박절편하였다. 이것을 uranyl acetate와 lead citrate로 이중 염색한 다음 투과전자현미경으로 관찰하였다.